免疫组化试剂盒 大鼠 SOD 大鼠 SOD 免疫组化试剂盒

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大鼠 sod 免疫组化试剂盒
该试剂盒以 hrp 标记的链霉亲和素复合物(hrp streptavidin conjugate,
hrp-sa)为基础,可用于检测细胞、组织内的特异性 sod 抗原。该试剂盒具有灵
敏度高、特异性强、定性定位准确、背景清晰。在所用的 sod 一抗与相应靶抗原
结合后,用生物化二抗与一抗特异性结合,最后加入 hrp-sa,形成抗原—特异
一抗—生物素化二抗—hrp-sa复合物,显微镜下观察成像。
试剂盒所含试剂:
试剂a通透液:0.1%triton-x100 10ml(选用)
试剂b封闭缓冲液(封闭用)20ml
试剂c(原装进口分装)已稀释的即用型sod一抗(2.5ml)
试剂d(原装进口分装)生物素化羊抗兔igg1支
(浓度1.5mg/ml,稀释比为1:300~1:500)50μl+抗体稀释液20ml
试剂ehrp-sa复合物1支(浓度1μm,稀释比1:50~1:200)100μl
试剂fdab显色液5ml
用户自备试剂:
1.10mmtbs(ph7.2~7.4)
三羟基氨基甲烷1.21g
氯化钠7.6g
加蒸馏水800ml,浓盐酸调ph值至7.2~7.4,最后定容至1000ml
tbs-t:tbs+tween20(0.05%体积比)
2.抗原修复液(依检测抗原不同而选择不同的修复液)
10mmph6.0柠檬酸缓冲液
柠檬酸0.38g
柠檬酸三钠2.45g
加蒸馏水900ml,浓盐酸调ph值至6.0,最后定容至1000ml
或:0.5medta修复液(ph8.0)
edta·2h2o186.1g
柠檬酸三钠2.45g
加蒸馏水700ml,用10mmnaoh调ph值至8.0,最后定容至1000ml
3.缓冲甘油封固剂10ml
4.tween205ml
石蜡包埋组织切片免疫染色
实验步骤(建议方案) :
石蜡包埋组织切片免疫染色
实验步骤(建议方案) :
石蜡包埋组织切片3~4μm厚度
1.烤片:将待做切片置于切片架上,于60℃恒温烤箱中至少烤1hr;
2.脱蜡: 切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡 3 次(即二甲苯ⅰ、ⅱ、ⅲ) ,每次
10min;
3.水化: 切片经下行酒精水化,无水乙醇 5min,95%乙醇 2 次(每次 2min) ,85%
乙醇2min;75%乙醇2min,自来水冲洗,ddh2o洗2×2min;
4.抗原修复: 根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复,常采用高压、微波(温
度达到98~100℃)或酶消化修复法,室温自然冷却,自来水冲洗,ddh2o 洗 2×
2min,tbs 洗涤(2×2min) (具体修复方法见附 1)* 注:有些抗原勿需修复,
直接进入第5步封闭。
5.封闭:滴加试剂b,37℃湿盒孵育30min;
6.加一抗:滴加用试剂c(即用型一抗),37℃湿盒孵育2hr或4℃过夜;
7.洗涤:tbs-t洗涤(3×5min);
8.封闭:滴加试剂b,37℃湿盒孵育10min;
9.加二抗: 滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗(试剂 d) ,37℃湿盒中孵育
30min;
10.洗涤:tbs-t洗涤(3×5min);
11.封闭:滴加试剂tween20,37℃湿盒孵育封闭20min;
12.加hrp-sa: 滴加用抗体稀释液稀释的试剂 e(1:50~200,终浓度 5~20 nm) ,
37℃湿盒中孵育30min;
13.洗涤:tbs-t洗涤(3×5min),tbs洗涤(2×5min);
14.显色:应用dab溶液(试剂f)显色;
15.复染:自来水充分冲洗,复染,脱水,透明;
16.封片:待组织标本干后,用试剂缓冲甘油封固剂封片;
17.观察成像:显微镜下观察成像。
注意事项:
1.修复后缓冲液须自然冷却,自来水冲洗后方能把切片取出,骤冷有可能导致
结晶或抗原封闭。
2.缓冲液的量必须保证所有切片都能浸泡到,用过的柠檬酸缓冲液不能反复使
用。
3.若试剂为微量浓缩液,用前应低速离心,将内盖和管壁附着的溶液离到底部。
4.封片前一定要换用tbs充分洗涤,以便洗去组织上残留的tween 20,否则会
影响结果观察。
5.如须复染细胞核,则在封片前复染或直接采用含有染核试剂的封片剂进行封
片。
附 1:
抗原修复方法
附 1:
抗原修复方法
常用抗原修复液:柠檬酸缓冲液(0.01m ph6.0) 、edta 抗原修复液(ph8.0 或
9.0)等等。
一、酶消化修复法
切片脱蜡水化处理,tbs 冲洗,在组织上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶,37℃孵育
20~30min后tbs冲洗即可。
二、微波抗原修复法
微波盒中加入抗原修复液微波加热至沸腾, 将脱蜡水化后的切片置于耐高温塑料
切片架上,放入已沸腾的缓冲液中,中档或高档继续微波 10~15min,取出微波
盒冷却至室温后, 自来水冲洗, 取出切片。 因不同微波炉微波处理时间存在差异,
须自行调整。
三、直接高压抗原修复法
取修复液于不锈钢高压锅中加热至沸腾,将组织切片置于耐高温切片架上,修复
液沸腾后放入切片架,盖上锅盖,待喷气后计时 1.5~2.5min 即可脱离热源,自
然冷却至室温后自来水冲洗, 取出切片。 此方法适用于较难检测或核抗原的修复。
四、隔水式高压抗原修复法
不锈钢高压锅中加自来水加热至沸腾, 微波盒中加入修复液于微波炉中加热至沸
腾,将切片放入微波盒中,再将微波盒放入高压锅中盖上锅盖,待喷气后计时
4~8 min 即可关闭热源,自然冷却至室温后自来水冲洗,取出切片。此方法适用
于较难检测或核抗原的修复。
大鼠 sod 免疫组化试剂盒   详细说明书欢迎免费索取

上海圻明生物科技有限公司
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